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小鼠ELisa试剂盒原理及样品收集

时间:2022/7/18 11:24:13 浏览量:213
 

小鼠ELisa试剂盒检测原理

  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

小鼠ELisa试剂盒样品收集、处理及保存方法

1.  血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

小鼠ELisa试剂盒自备物品

1. 酶标仪(450nm)

2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

小鼠ELisa试剂盒操作注意事项

1.  试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

3.  标准品稀释液即可视为阴性对照或者空白;预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

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